Энэ үгүүлэл “Үбшэн үүсхэгшэ ба хорхой шумуулнуудта үрэһэтэй ургамалнуудай эсэргүүсэлые дээшэлүүлгэ” гэһэн шэнжэлэлгын сэдэбтэ ороно, бүхы 5 үгүүлэлнүүдые хараха
Мөөгөнцөрөй ургамалай үбшэнэй некроз Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary элдэб эзэн ургамалнуудые халдабарилхын тулада олон шата стратеги хэрэглэдэг. Энэ шэнжэлэлгэ Pseudomonascleromonatiorums үүсхэһэн сагаан хэбтэ Phaseolus vulgaris L.-эй молекулярна, физиологиин ба биохимиин харюуе дээшэлүүлхын тулада бусад шухала аминохүшэлэй синтезые эдэбхижүүлдэг уураг бэшэ аминохүшэл болохо диамин L-орнитин хэрэглэхэ тухай дурадхана. In vitro туршалганууд L-орнитин тунһаа дулдыдаха аргаар S. pyrenoidosa-гай мицелиин ургалтые ехээр даража байһые харуулаа. Үшөө тиихэдэ, энэнь теплицын байдалда сагаан хөгцөөнэй хүндые ехээр багадхажа шадаха. Үшөө тиихэдэ, L-орнитин эмшэлһэн ургамалай ургалтые эдэбхижүүлһэн, энэнь L-орнитинэй туршагдаһан концентраци эмшэлһэн ургамалнуудта фитотоксик бэшэ гэжэ харуулна. Нэмэжэ хэлэхэдэ, L-орнитин ферментгүй антиоксидантнуудай (ниитэ уһалдаг феноликууд ба флавоноидууд) ба ферментнэ антиоксидантнуудай (каталаза (CAT), пероксидаза (POX), ба полифенол оксидаза (PPO)) илгаралые нэмэгдүүлжэ, гурбан антиоксиданттай холбоотой генүүдэй (PSO1, PVGRAT, ба PAVVD) илгаралые нэмэгдүүлһэн байна. Үшөө тиихэдэ, in silico шэнжэлэлгын дүнгөөр ​​S. sclerotiorum геномдо оксалоацетат ацетилгидролаза (SsOAH) уураг байгаа гэжэ элирүүлһэн, энэнь Aspergillus fijiensis (AfOAH) ба Penicillium sp. (PlOAH) функциональна шэнжэлэл, хадгалагдаһан доменүүд, топологиин талаар. Һонирхолтойнь гэхэдэ, L-орнитиные картофельнэ декстрозын шүлэн (PDB) оршондо нэмэхэдэ S. sclerotiorum мицелидэ SsOAH генэй илгарал ехээр буурһан байна. Үшөө тиихэдэ, L-орнитинай экзогеннэ хэрэглэлгэ эмшэлһэн ургамалһаа суглуулһан мөөгөнцөрөй мицелидэ SsOAH генэй илгаралые ехээр бууруулжа шадаһан байна. Һүүлдэнь, L-орнитин хэрэглэлгэ PDB оршон болон халдабарита набшаһанда шүлтэнэй хүшэлтүрэгшын шүүрэлые ехээр бууруулжа шадаа. Түгэсхэлдэнь, L-орнитин халдабарита ургамалай хамгаалха харюуе дээшэлүүлхэһээ гадна редокс байдалые хадгалхада гол үүргэ гүйсэдхэнэ. Энэ шэнжэлэлгын дүнгүүд сагаан хэбтэшэтэй тэмсэхэ, үрэһэ таряанай үйлэдбэрилэл болон бусад ургамалнуудта үзүүлхэ нүлөөе намдааха шэнэ оньһото, оршон тойронхи байгаалида ээлтэй аргануудые зохёоходо туһалха аргатай.
Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary гэһэн үхэһэн мөөгөнцөрһөө үүдэһэн сагаан хөгц дэлхэйн үрэһэ (Phaseolus vulgaris L.) үйлэдбэрилэлдэ ноцтой аюул ушаруулдаг һүйдхэлтэй, ургаса бууруулжа байдаг үбшэн юм (Bolton et al., 2006). Sclerotinia sclerotiorum хадаа 600 гаран ургамалай зүйлнүүдэй үргэн эзэмшэлтэй, тусхай бэшэ аргаар эзэнэй эдые түргэн һүжэрүүлхэ шадалтай, хянаха эгээл хэсүү газарай ургамалай эмгэг үүсхэгшэдэй нэгэн юм (Liang and Rollins, 2018). Таатай бэшэ байдалда амидаралай циклэй шухала үе шатада орожо, удаан хугасаанай туршада хара, хатуу, үрэһэ шэнги бүтэсэтэй, 'склероти' гэжэ нэрэтэй, гү, али халдабарита ургамалай мицелий гү, али үндэһэнэй шэлбэ соо сагаан, сэбэрхэн ургамалнууд боложо унтажа байдаг (Schwartz et al., 2005). S. sclerotiorum склероти бии болгохо шадалтай, энэнь халдабарита газарта удаан хугасаагаар амидаржа, үбшэнэй үедэ амидарха боломжо олгодог (Schwartz et al., 2005). Склеротинууд тэжээлээр баян, газарта удаан хугасаагаар үлэжэ шадаха ба удаадахи халдабаринуудта анханай тарилга болодог (Schwartz et al., 2005). Таатай байдалда склеротинууд ургажа, ургамалай газар дээрэхи бүхы хэһэгүүдые, тэрэ тоодо сэсэгүүдые, һэеы гү, али үрэһэ халдабарилха аргатай агаарай споронуудые бии болгодог (Schwartz et al., 2005).
Sclerotinia sclerotiorum өөрынгөө эзэн ургамалнуудые халдабарилхын тулада олон шата стратеги хэрэглэдэг, энэнь склерозой ургахаһаа эхилээд шэнжэ тэмдэгэй хүгжэл хүрэтэр хэд хэдэн зохисуулһан үйлэ ябадалнуудые багтаадаг. Анхандаа S. sclerotiorum апотеци гэжэ нэрэтэй мэнгэ шэнги бүтэсэһээ үлгөөтэй споронуудые (аскоспора гэжэ нэрлэдэг) гаргадаг, тэдэнь агаарта дамжан халдабарита ургамалай хог хаягдал дээрэ хүдэлөөнгүй склероти боложо хүгжэнэ (Bolton et al., 2006). Удаань мөөгөнцөр ургамалай эсэй ханануудай рН-ые хянаха, ферментын задарал ба эдэй нэбтэрэлгые дэмжэхэ (Hegedus and Rimmer, 2005), эзэн ургамалай исэлдэлтын дэлбэрэлтые дараха зорилгоор вирулентностьын хүшэлтүрэгшэ болохо шүлтэнэй хүшэлые шэлжүүлдэг. Энэ хүшэлтүрэгшын үйлэ ябаса ургамалай эсэй ханые сула болгожо, мөөгөнцөрөй эсэй ханые задалдаг ферментүүдэй (CWDEs) хэб маягай ба үрэ дүнтэй ажаллалгада таатай оршон байгуулжа, эмгэг үүсхэгшэ физикын һаадые дабажа, эзэнэй эд эстэ нэбтэрхэ боломжо олгодог (Marciano et al., 1983). Нэгэтэ нэбтэрһэн хойноо S. sclerotiorum полигалактуроназа ба целлюлоза гэхэ мэтэ олон тооной CWDE-ые шэлжүүлдэг, энэнь халдабарита эд эстэ тархалтые хялбаршуулдаг ба эдэй некроз үүсхэнэ. Гэмтэл ба гифалай дэбисхэрэй үргэлжэлэл сагаан хөгцөөнэй шэнжэ тэмдэгүүдтэ хүргэдэг (Hegedus and Rimmer, 2005). Гэхэ зуура, эзэн ургамалнууд эмгэг үүсхэгшэтэй холбоотой молекулярна хэбүүдые (PAMPs) хэб маягые таниха рецепторнуудаар (PRRs) танижа, эгээ һүүлдэ хамгаалха харюунуудые эдэбхижүүлдэг дохёо дамжуулха үйлэ ябасануудые үүсхэнэ.
Хэдэн арбаад жэлэй туршада үбшэнтэй тэмсэхэ оролдолго гаргаһаншье һаа, эмгэг үүсхэгшын эсэргүүсэл, амидарал, дабшаха шадабариһаа боложо, бусад худалдаанай ургамалнуудтал адли үрэһэ таряанда хангалтатай эсэргүүсэлтэй үрэһэтэй плазмын дутагдал үлэбэ. Тиимэһээ үбшэниие эмнэлгэ тон хүндэ хүшэр болоод соёлой дүримүүдые, биологическа хяналтые, химиин фунгицидүүдые хослуулан хэрэглэхэ нэгэдэһэн, олон янзын стратеги шаардана (O'Sullivan et al., 2021). Сагаан хөгцөө химиин аргаар хянаха гээшэ эгээл үрэ дүнтэй, юундэб гэхэдэ фунгицидүүдые зүбөөр, зүб сагта хэрэглэхэдээ, үбшэнэй тархалтые үрэ дүнтэйгээр хинадаг, халдабариин хүндые багадхадаг, ургаса алдалгые бага болгодог. Гэбэшье, үлүү ехээр хэрэглэхэ ба фунгицидүүдые үлүү ехээр найдаха гээшэ S. sclerotiorum-ай эсэргүү штаммууд бии боложо, зорилгогүй организмуудта, газарай элүүр мэндэдэ, уһанай шанарта муугаар нүлөөлдэг (Le Cointe et al., 2016; Ceresini et al., 2024). Тиимэһээ оршон тойронхи байгаалида ээлтэй арга боломжонуудые олохо гээшэ гол зорилго болоһон байна.
Путресцин, спермидин, спермин, кадаверин гэхэ мэтэ полиаминууд (ПА) газарай ургамалай эмгэг үүсхэгшэдэй эсэргүү найдабаритай арга боломжо боложо үгэхэ ба тиигэжэ аюултай химиин фунгицид хэрэглэлгые бүримүһэн гү, али хэһэг хубиар багадхаха (Nehela et al., 2024; Yi et al., 2024). Дээдэ ургамалнуудта ПА-нууд олон физиологиин үйлэ ябасада хабаададаг, энэ тоодо эсэй хубаари, дифференциаци, абиотикын ба биотикын стрессүүдтэ харюу (Killiny and Nehela, 2020). Тэдэ антиоксидант үүргэ гүйсэдхэжэ, реактивна хүшэлтүрэгшын зүйлнүүдые (ROS) арилгаха, редокс гомеостазые хадгалха (Nehela and Killiny, 2023), хамгаалха генүүдые үүсхэхэ (Romero et al., 2018), элдэб бодосой солилсооной замые зохисуулдаг (Nehela and Killiny, 2023), эндофилон ба гемологуудые модуляцилха (Nehela and Killiny, 2023) аргатай. Киллини, 2019), системэтэй олдоһон эсэргүүсэл (SAR) байгуулха, ургамал-эмгэг үүсхэгшын харилсан үйлэшэлэлгэ зохисуулдаг (Нехела ба Киллини, 2020; Асия ба бусад, 2022; Червониец, 2022). Ургамалай хамгаалха ПА-гай тусхай механизмууд ба үүргэ ургамалай зүйл, эмгэг үүсхэгшэ, оршон тойроной байдалһаа хамааран өөр өөр байдагые тэмдэглэхэ шухала. Ургамалай эгээл элбэг PA-нь шухала полиамин L-орнитинһээ биосинтезировалагдадаг (Killiny and Nehela, 2020).
L-орнитин ургамалай ургалтада ба хүгжэлтэдэ олон үүргэ дүүргэдэг. Жэшээнь, урданай шэнжэлэлнүүдэй дүнгөөр ​​будаа (Oryza sativa)-да орнитин азотой дахин болбосоруулха (Liu et al., 2018), будаанай ургаса, шанар ба үнэр (Lu et al., 2020), уһанай стрессэй харюу (Yang et al., 2000) гэхэ мэтэтэй холбоотой байжа болоно. Үшөө тиихэдэ, L-орнитинай экзогеннэ хэрэглэлгэ саахар бургааһанай (Beta vulgaris) (Hussein et al., 2019) ган гасуурта тэсэбэриие ехээр дээшэлүүлжэ, сонгино (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu and Çavuşoǧlu, 2021) болон cawcardium (Accidale) ургамалай (Cavuşoǧlu and Çavuşoǧlu) дабһанай стрессые намдааһан байна. Роча ба бусад, 2012). L-орнитинай абиотикын стрессһээ хамгаалха боломжотой үүргэнь эмшэлһэн ургамалнуудта пролинай хуримталал үйлэдэлдэ хабаатай байжа болоно. Жэшээнь, пролинай бодосой солилсоондо хабаатай генүүд, жэшээнь орнитин дельта аминотрансфераза (дельта-OAT) ба пролин дегидрогеназа (ProDH1 ба ProDH2) генүүд, уридшалан Nicotiana benthamiana ба Arabidopsis thaliana-ые эзэн бэшэ Pseudomonas штаммуудһаа хамгаалха хэрэгтэ хабаатай гэжэ мэдээлэгдэһэн байна (Kumarh-S, and Mysoreh. 2012). Нүгөө талаһаа, эмгэг үүсхэгшын ургалтада мөөгөнцөрөй орнитин декарбоксилаза (ODC) хэрэгтэй (Singh et al., 2020). Fusarium oxysporum f-эй ODC-ые зорюулха. sp. lycopersici эзэнһээ үүдэһэн генэй абяагүй болгохо (HIGS) аргаар помидорой ургамалай Fusarium wilt-да эсэргүүсэлые ехээр дээшэлүүлһэн байна (Singh et al., 2020). Гэбэшье, фитопатоген мэтэ биотическэ стрессүүдтэ эсэргүү экзоген орнитин хэрэглэлгын боломжотой үүргэ һайнаар шэнжэлэгдээгүй байна. Үшөө шухалань гэхэдэ, орнитинай үбшэндэ эсэргүүсэлдэ үзүүлхэ нүлөө болон тэрээнтэй холбоотой биохимиин болон физиологиин үзэгдэлнүүд ехэнхидээ шэнжэлэгдээгүй байна.
Буурцагай S. sclerotiorum халдабариин орёо байдалые ойлгохо гээшэ үрэ дүнтэй хяналтын стратегинуудые зохёоходо шухала. Энэ шэнжэлэлгын үедэ бидэ диамин L-орнитинай Sclerotinia sclerotiorum халдабариһаа хамгаалха механизм болон эсэргүүсэлые дээшэлүүлхэ гол хүшэлтүрэгшэ болохо боломжотой үүргые элирүүлхэ зорилго табиһан байнабди. Халдабарита ургамалай хамгаалха харюуе дээшэлүүлхэһээ гадна, L-орнитин редокс байдалые хадгалхада гол үүргэ гүйсэдхэнэ гэжэ бидэ таамагладагбди. L-орнитинай боломжотой нүлөөнүүд ферментнэ ба ферментнэ бэшэ антиоксидант хамгаалха механизмуудые зохисуулха, мөөгөнцөрөй эмгэг үүсхэгшэ/вирулентнэ хүшэлтүрэгшэд болон холбоотой уурагуудта һаад ушаруулхатай холбоотой гэжэ бидэ дурадханабди. L-орнитинай энэ хоёр үйлэ ажалалгаа сагаан хэбтэшэ нүлөөе намдааха ба энэ хүшэрхэг мөөгөнцөрөй эмгэг үүсхэгшэдэ ниитэ үрэ таряанай эсэргүүсэлые дээшэлүүлхэ тогтвортой стратегиин найдабаритай кандидат болгодог. Мүнөөнэй шэнжэлэлгын дүнгүүд сагаан хөгцөө хянаха, үрэ таряанай үйлэдбэрилэлдэ үзүүлхэ нүлөөе намдааха шэнэ оньһото, оршон тойронхи байгаалида ээлтэй аргануудые хүгжөөлгэдэ туһалха аргатай.
Энэ шэнжэлэлгын үедэ туршалгын материал болгон юрын үрэһэнэй мэдрэмтгий олзын хэрэг эрхилэлгын сорт Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3) хэрэглэгдээ. Египедэй Хүдөө ажахын шэнжэлэлгын түбэй (ARC) Хээрын ургамалнуудые шэнжэлхэ ухаанай дээдэ һургуулиин (FCRI) үрэһэ таряалангай шэнжэлхэ ухаанай таһагһаа элүүр үрэһэ үршөөл хайратайгаар үгтэбэ. Табан үрэһэ S. sclerotiorum-ээр халдабарилагдаһан шоройгоор дүүргэгдэһэн пластик тогоон соо (дотоодо диаметр 35 см, гүн 50 см) теплицын байдалда (25 ± 2 °C, харисангы чийгшэл 75 ± 1%, 8 саг гэрэл/16 саг харанхы) таряа. Тарилгын һүүлдэ 7-10 хоногой үнгэрһэн хойно (DPS) үрэһэ нимгэрүүлжэ, тогоон бүхэндэ гансал хоёр үрэһэ нэгэ янзын ургасатай, гурбан дүүрэн дэлгэрһэн набшаһа үлөөдэг байгаа. Бүхы тогоон соохи ургамалнуудые хоёр долоон хоногто нэгэ дахин уһалжа, үгтэһэн сортын дурадхагдаһан хэмжээгээр һара бүри бордоо үгэдэг байгаа.
L-орнитиндиамин (мүн (+)-(S)-2,5-диаминопентановой хүшэлтүрэгшэ гэжэ нэрлэдэг; Sigma-Aldrich, Дармштадт, Германи) 500 мг/л концентраци бэлдэхэдээ, 50 мг-ые түрүүн 100 мл ариун нэрэгдэһэн уһанда уһалһан байна. Удаань үндэһэн урасхалые шэлжүүлжэ, удаадахи туршалгануудта хэрэглэбэ. Тобшохоноор хэлэбэл, L-орнитинай концентрациин зургаан шэглэл (12.5, 25, 50, 75, 100, ба 125 мг/л) in vitro туршагдаһан байна. Нэмэжэ хэлэхэдэ, ариутгаһан нэрмэгдэһэн уһа сүлөөтэ хяналтын (Mock) болгон хэрэглэбэ, тиихэдэ худалдаанай фунгицид “Rizolex-T” 50% нойтон болодог порошок (токлофос-метил 20% + тирам 30%; KZ-Kafr El Zayat Pesticides and Chemicals Company, Kafr El Zayat, Gharbia Governate, Egptan) эерэг хяналтын аргаар хэрэглэгдээ. Худалдаанай фунгицид “Ризолекс-Т” табан концентрацида (2, 4, 6, 8 ба 10 мг/л) in vitro туршагдаһан байна.
Сагаан хөгцөөнэй шэнжэтэй (халдабариин хэмжээ: 10–30%) юрын үрэһэтэй үрэһэтэй һэеы ба үрэһэтэй дээжэ олзын хэрэг эрхилэлгын ажахынуудһаа суглуулагдаһан байна. Хэдыгээр халдабарита ургамалай материалнуудай ехэнхинь зүйл/сортоор (мэдрэмтгий олзын хэрэг эрхилэлгын сортын Giza 3) тодорхойлогдоһоншье һаа, бусадынь, илангаяа нютагай заха зээлһээ абтаһаниинь, мэдэгдээгүй зүйлнүүд байгаа. Суглуулһан халдабарита материалнуудые нэн түрүүн 0.5% натрийн гипохлоридай урасхалаар 3 минутын туршада гадаргуугай халдабаригүй болгоод, удаань ариун нэрэмэл уһаар хэдэн дахин зайлажа, ариун шүүгшын саарһаар аршажа, үлүү уһа зайлуулһан байна. Удаань халдабарита эрхэтэнүүдые дунда эдһээ (элүүр ба халдабарита эдэй хоорондо) багахан хэһэгүүдээр хубаажа, картофельнэ декстрозын агар (PDA) оршон дээрэ үржүүлжэ, 25 ± 2 °C-та 12 саг гэрэл/12 саг харанхы циклтэйгээр 5 хоногой туршада инкубаци хэжэ склеротиин бии бололго эдэбхижүүлээ. Мицелиин үзүүрэй арга холимог гү, али бузарлагдаһан соёлһоо мөөгөнцөрөй тусгаарлалтануудые сэбэрлэхэдээ баһа хэрэглэгдэдэг байгаа. Сэбэрлэгдэһэн мөөгөнцөрөй тусгаарлалта анха соёлой морфологиин шэнжэ шанарнууд дээрэ үндэһэлэн элирүүлэгдэһэн, удаань микроскопическа шэнжэнүүд дээрэ үндэһэлэн S. sclerotiorum гэжэ баталагдаһан. Һүүлдэнь, бүхы сэбэрлэгдэһэн тусгаарлалтануудые Кохын постулатуудта тааруулан, мэдрэмтгий ниитэ үрмэ сортын Гиза 3 дээрэ эмгэг үүсхэгшэ шэнжэтэйгээр туршаһан байна.
Нэмэжэ хэлэхэдэ, эгээл нэбтэрһэн S. sclerotiorum тусгаарлалта (тусгаарлалта #3) White et al., 1990-эй тодорхойлһон ёһоор дотоодо транскрипциин зайлагша (ITS) дараалал дээрэ үндэһэлжэ баталагдаа; Baturo-Ciesniewska et al., 2017. Тобшохоноор хэлэбэл, тусгаарлагдаһан зүйлнүүдые картофельнэ декстрозын шүлэндэ (PDB) үрэжүүлжэ, 25 ± 2 °C-та 5–7 хоногой туршада инкубаци хэбэ. Удаань мөөгөнцөрөй мицелий суглуулагдажа, марляар шүүгдэжэ, ариун уһаар хоёр дахин угаагдажа, ариун шүүһэн саарһаар хатаагдаһан байна. Геномой ДНХ-ые Quick-DNATM Fungal/Bacterial Miniprep Kit (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah et al., 2022, 2024) хэрэглэн тусгаарлаһан байна. ITS рДНК-гай бүһэ нютагые ITS1/ITS4 тусхай праймер хос (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; хүлеэгдэһэн хэмжээ: 540 bp) хэрэглэн олшоруулһан байна ( Baturo-Ciesniewska et al., 2017 ). Сэбэрлэгдэһэн ПЦР-эй бүтээлнүүдые дараалал шэнжэлэлгын (Бээжэнэй Аоке Дингшэн Биотехнологиин Ко., Лтд.) оруулһан байна. ITS рДНХ-эй дараалалнуудые Сэнгерэй дараалал шэнжэлэлгын аргаар хоёр шэглэлээр дараалал болгоһон байна. Суглуулһан асуудалнуудай дараалалнуудые BLASTn программын ашаар GenBank болон Үндэһэтэнэй Биотехнологиин Мэдээсэлэй Түбэй (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) һүүлшын мэдээсэлнүүдтэй зэргэсүүлһэн байна. Асуудалай дараалалые NCBI GenBank-ай һүүлшын мэдээсэлһээ абтаһан бусад 20 S. sclerotiorum штамм/изоляцитай (Нэмэлтэ таблица S1) молекулярна хубисхалай генетикын шэнжэлэлгын багтаамжа (MEGA-11; 11-дэхи хубилалта) (Kumar et al., 2024) соохи ClustalW хэрэглэн зэргэсүүлһэн байна. Хубисхалай шэнжэлэлые эгээн ехэ магадлалтай арга болон ниитэ саг хугасаанай эргэлзээтэй нуклеотид һэлгэлтын загбарые хэрэглэн хэһэн байна (Nei and Kumar, 2000). Эгээл ехэ лог-магадлалтай модон харуулагдана. Эвристикын бэдэрэлгын анханай модые хүршэ-холболто (NJ) модон (Kumar et al., 2024) ба эгээн ехэ парсимони (MP) модоной хоорондохи үндэр лог-магадлалтай модые шэлэхэ замаар шэлэнэ. Нью-Джерси модон ниитэ сагай эргэлзээтэй загбарые хэрэглэн тоосогдоһон хос зай матрицые хэрэглэн бүтээгдэһэн (Nei and Kumar, 2000).
L-орнитинай ба “Ризолекс-Т” бактерицидэй антибактериальна эдэбхитэй байдалые агар диффузиин аргаар in vitro тодорхойлһон байна. Арга: L-орнитинай үндэһэн урасхалые (500 мг/л) зохистой хэмжээгээр абажа, 10 мл PDA тэжээлэй оршонтой һайнаар холижо, 12.5, 25, 50, 75, 100 ба 125 мг/л һүүлшын концентрацитай урасхал бэлдэхэ. Хяналтын зорилгоор “Ризолекс-Т” (2, 4, 6, 8 ба 10 мг/л) фунгицидэй табан концентраци ба ариутгаһан нэрэмэл уһа хэрэглэбэ. Оршон хатуужаһанай һүүлдэ, 4 мм диаметртэй Sclerotinia sclerotiorum соёлой шэнэхэн бэлдэһэн мицелиин залгуурые Петриин табагай түб руу шэлжүүлжэ, 25±2°C-та мицелий бүхы хяналтын Петриин табагые хушаха болотор үрэжүүлһэн, удаань мөөгөнцөрөй ургалтые тэмдэглэһэн байна. S. sclerotiorum-ай радиальна ургалтын даралгын хубиие 1-дэхи тэгшэлгэ хэрэглэн тоолохо:
Туршалга хоёр дахин дабтагдаһан, хяналтын/туршалгын бүлэг бүхэндэ зургаан биологическа дабталга, биологическа дабталга бүхэндэ табан тогоон (тогоон бүхэндэ хоёр ургамал). Туршалгын дүнгүүдэй зүб, найдвартай, дахин дабтагдаха шадабариие хангахын тулада биологическа дабталга бүхэниие хоёр дахин (хоёр техническэ дабталга) шэнжэлһэн байна. Нэмэжэ хэлэхэдэ, пробитын регрессиин шэнжэлэлые хахад дээдын дарангылалгын концентраци (IC50) ба IC99 (Prentice, 1976) тоосоходо хэрэглэбэ.
Хүлэмжын оршон байдалда L-орнитинай боломжые сэгнэхэ зорилгоор хоёр дараалан тогооной туршалгануудые үнгэргэбэ. Тобшохоноор хэлэбэл, тогоонуудые стерилизацилагдаһан шабар-элһэн шоройгоор (3:1) дүүргээд, S. sclerotiorum-ай шэнэхэн бэлдэһэн соёлоор таряалан. Нэгэдэхеэр, S. sclerotiorum-ай эгээл нэбтэрһэн тусгаарлалта (тусгаарлалта #3) нэгэ склеротиие хахад болгон хубаажа, PDA дээрэ нюураа доошонь табижа, 25°C-та байнгын харанхыда (24 саг) 4 хоногой туршада инкубаци хэжэ мицелиин ургалтые эдэбхижүүлһэн байна. Удаань 5 мм диаметртэй дүрбэн агар залгуурые түрүүшын захаһаа абажа, 100 г үбһэнэй ба будаанай хивэгэй ариун холисотой (1:1, v/v) таряалан, бүхы колбонуудые 25 ± 2 °C температурада 12 саг гэрэл/12 саг харанхы цикл доро 5 хоногой туршада склероз бии болгохын тулада инкубаци хэбэ. Бүхы колбонуудай агуулгые шорой нэмэхэһээ урид нэгэ янзын байхын тулада һайнаар холиһон байна. Удаань эмгэг үүсхэгшэдэй тогтомол концентрацитай байхын тулада тогоон бүхэндэ 100 г колонизацилагша хивэгэй холисо нэмэгдэбэ. Тариһан тогоонуудые уһалжа, мөөгөнцөрөй ургалтые эдэбхижүүлжэ, 7 хоногой туршада теплицэдэ табиһан байна.
Удаань тогоон бүхэндэ Гиза 3 сортын табан үрэ таряа. L-орнитин ба Rizolex-T фунгицидээр эмшэлһэн тогоонуудта стерилизацилагдаһан үрэһэ 250 мг/л ба 50 мг/л тухай һүүлшын IC99 концентрацитай хоёр нэгэдэлэй уһанай уһанда хоёр часай туршада дэбтээжэ, удаань тарилгын урда тээ нэгэ часай туршада агаарта хатаагдаһан байна. Нүгөө талаһаа, үрэһэ ариутгаһан нэрэмэл уһанда дэбтээжэ, сүлөөтэ хяналтын аргаар дэбтээбэ. Арбан хоногой үнгэрһэн хойно, түрүүшын уһалхаһаа урид, үрэһэ нимгэн болгожо, тогоон бүхэндэ гансал хоёр сэбэрхэн үрэһэ үлөөдэг байгаа. Нэмэжэ хэлэхэдэ, S. sclerotiorum-ээр халдабари абахын тулада, нэгэ хүгжэлэй шатада (10 хоног) үрмэ ургамалай һэеыень ариутгаһан скальпель хэрэглэн хоёр ондо ондоо газарта тайража, шарха бүхэндэ ойролсоогоор 0.5 г колонизацилагша хивэгэй холисо хэжэ, удаань халдабариие эдэбхижүүлхын тулада үндэр чийгшэлые эдэбхижүүлжэ, бүхы халдабарита ургамалнуудые халдабарилһан байна. Хяналтын ургамалнуудые адли шархатаһан ба тэнсүү хэмжээнэй (0.5 г) ариутгаһан, колонизацилагдаагүй хивэгэй холисо шарха руу оруулаад, үбшэн хүгжэхэ оршон тойронхиие дууряажа, эмшэлгын бүлэгүүдэй хоорондохи нягта байдалые хангахын тулада үндэр чийгшэлтэй байлгаба.
Эмшэлгын арга: Үбһэнэй үрэһэ 500 мл L-орнитин (250 мг/л) гү, али фунгицид Rizolex-T (50 мг/л) уһанай урасхалаар газар уһалжа уһалһан, удаань 10 хоногой зайтайгаар гурба дахин эмшэлгэ дабтаһан. Плацебо эмшэлһэн хяналтын бүлэгүүдые 500 мл ариун нэрэгдэһэн уһаар уһалһан байна. Бүхы эмшэлгэнүүдые теплицын байдалда (25 ± 2°C, 75 ± 1% харисангы чийгшэл, 8 саг гэрэл/16 саг харанхы) үнгэргэһэн байна. Бүхы тогоонуудые хоёр долоон хоногто нэгэ удаа уһалжа, һара бүри тэнсүүритэй NPK бордоогоор (20-20-20, 3.6% хүхэр ба TE микроэлементнүүдтэй; Zain Seeds, Egypt) 3–4 г/л концентрацитайгаар тусхай сортын дурадхалнууд болон үйлэдбэрилэлэй заабаринуудай ёһоор набшаһанай шүршүүрээр эмшэлдэг байгаа. Хэрбээ ондоогоор хэлэгдээгүй һаа, дүүрэн дэлгэрһэн болбосорһон набшаһадые (дээдэ талаһаа 2-дохи ба 3-дахи набшаһад) эмшэлгын һүүлдэ 72 сагта (hpt) биологическа репликаци бүхэнһөө суглуулжа, гомогенизацилжа, суглуулжа, -80 °C-та хадагалжа, саашадаа шэнжэлэл хэхэдээ, энэ тоодо, гэбэшье хизаарлагдахагүй, исэлдэлтын стрессэй гистохимиин локализаци, липидэй пероксидант үзүүлэлтэдэ, энзидүүдэй ба ферментын ферментгүй антиоксидантнууд ба генэй илгарал.
Сагаан хөгцөөнэй халдабариин эршэм хүсэн тарилгаһаа хойшо долоон хоногто 21 хоногой дараа (dpi) 1–9 хэмжүүрээр (Нэмэлтэ таблица S2) Teran et al. (2006). Тобшохоноор хэлэбэл, үрэһэтэй ургамалай һэеы ба һалаануудые тарилгын газарһаа эхилээд шэнжэлжэ, зангилаанууд хоорондын ба зангилаануудаар гэмтэлэй үргэлжэлэлые дагажа үзэбэ. Удаань тарилгын газарһаа үндэһэн гү, али һалаа дагуу эгээл холын газар хүрэтэрхи гэмтэлэй зайе хэмжэжэ, гэмтэлэй байрлалгаһаа дулдыдажа 1–9 сэгнэлтэ табиһан, эндэ (1) тарилгын газарай ойролсоо харагдаха халдабари үгы, (2–9) үбшэнэй хэмжээн аажамаар нэмэгдэжэ, зангилаанууд хоорондын зангилаануудаар үргэлжэлһэн байна (S2 таблица). Сагаан хөгцөөнэй халдабариин эршэм хүсэниие 2-дохи томьёогоор хуби болгон хубилгаа:
Нэмэжэ хэлэхэдэ, үбшэнэй үргэлжэлэлэй муруй дорохи талмай (AUDPC) томьёогоор тоосогдоо (Shaner and Finney, 1977), энэнь һаяхан 3-дахи тэгшэлгэ хэрэглэн ниитэ үрмэ сагаан ялзарха (Chauhan et al., 2020)-да тааруулһан байна:
Эндэ Yi = ti сагта үбшэнэй хүндэ байдал, Yi+1 = удаадахи сагта үбшэнэй хүндэ байдал ti+1, ti = түрүүшын хэмжүүрэй саг (үдэрөөр), ti+1 = удаадахи хэмжүүрэй саг (үдэрөөр), n = саг гү, али ажаглалгын сэгнэлтэнүүдэй ниитэ тоо. Үбһэнэй ургамалай ургалтын үзүүлэлтые, тэрэ тоодо ургамалай үндэр (см), нэгэ ургамалай һалаануудай тоо, нэгэ ургамалай набшаһанай тоо бүхы биологическа дабталгада 21 хоногой туршада долоон хоногто бүридхэгдэдэг байгаа.
Биологиин дабталга бүхэндэ набшаһанай дээжэ (дээдэ талаһаа хоёрдохи ба гурбадахи дүүрэн хүгжэһэн набшаһад) эмшэлгын һүүлдэ 45-дахи үдэртэ (һүүлшын эмшэлгын һүүлдэ 15 үдэр) суглуулагдаһан байна. Биологическа хубилалта бүхэн табан тогоонһоо бүридэнэ (нэгэ тогоондо хоёр ургамал). Харанхыда 4 °C-та 80% ацетон хэрэглэн фотосинтезэй пигментнүүдые (хлорофилл а, хлорофилл б ба каротиноидууд) гаргажа абахада 500 мг оршом няһалһан эдэй хэрэглэбэ. саг үнгэрһэн хойно дээжэнүүдые центрифугировалжа, хлорофилл а, хлорофилл b ба каротиноидуудай агууламжа тодорхойлхын тулада супернатантые UV-160A спектрофотометр (Shimadzu Corporation, Japan) хэрэглэн (Lichtenthaler, 1987) гурбан ондо ондоо долгиной ута шэнгээхэ аргаар колориметрээр тодорхойлһон байна (А470, А646 ба А663 нм). Һүүлдэнь, фотосинтезэй пигментнүүдэй агууламжа Лихтенталерэй (1987) тодорхойлһон 4–6 томьёогоор тоосогдоо.
Эмшэлгын һүүлдэ 72 сагта (hpt) уһантүрэгшын пероксид (H2O2) ба супероксид анион (O2•−)-эй in situ гистохимиин локализациин түлөө биологическа репликэ бүхэнһөө набшаһадые (дээдэ талаһаа хоёрдохи ба гурбадахи дүүрэн хүгжэһэн набшаһад) суглуулаа. Биологическа хубилалта бүхэн табан тогоонһоо бүридэнэ (нэгэ тогоондо хоёр ургамал). Аргын зүб, найдбаритай, дахин дабтагдаха шадабариие хангахын тулада биологическа дабталга бүхэниие хоёр дахин (хоёр техническэ дабталга) шэнжэлһэн байна. H2O2 ба O2•− 0.1% 3,3′-диаминобензидин (DAB; Sigma-Aldrich, Дармштадт, Германи) гү, али нитрохүхэ тетразоли (NBT; Sigma-Aldrich, Дармштадт, Германи) хэрэглэн, тус тусдаа Romero-Puertas et al. (2004) ба Адам м.н. (1989) багахан хубилалтануудтай. H2O2-ые in situ гистохимиин локализациин тулада листовконуудые 10 мМ Tris буфертэ (рН 7.8) 0.1% DAB-тай вакуум нэбтэрүүлжэ, удаань 60 мин гэрэл доро танхимай температурада инкубаци хэбэ. Листовкануудые 0.15% (v/v) TCA-да 4:1 (v/v) этанол:хлороформ (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Egypt) соо сагаан болгоод, удаань харанхы болоторнь гэрэлдэ табиба. Үшөө тиихэдэ, O2•−-эй гистохимиин локализациин тулада 0.1 w/v % HBT агуулһан 10 мМ калиин фосфат буферээр (рН 7.8) вакуум нэбтэрүүлһэн байна. Набшаһадые 20 мин танхимай температурада гэрэл доро инкубаци хэжэ, удаань дээрэхи мэтэ сагаан болгожо, хара хүхэ/ягаан толбонууд бии болотор гэрэлтүүлээ. Үүсэһэн хүрин (H2O2 үзүүлэлтээр) гү, али хүхэ-ягаан (O2•− үзүүлэлтээр) үнгын эршэм хүсэн ImageJ (http://fiji.sc; 2024 оной 3 һарын 7-до ороһон) зураг болбосоруулха багтаамжын Фиджиин хубилалта хэрэглэн сэгнэгдэһэн байна.
Малондиальдегид (MDA; липидэй пероксидациин тэмдэглэгшэ) Du ба Bramlage (1992)-ай аргаар багахан хубилалтануудые оруулһанаар тодорхойлогдоһон байна. Биологиин дабталга бүхэнэй набшаһад (дээдэ талаһаа хоёрдохи ба гурбадахи дүүрэн хүгжэһэн набшаһад) эмшэлгын һүүлдэ 72 саг соо суглуулагдаһан (hpt). Биологическа хубилалта бүхэндэ табан тогоон (нэгэ тогоондо хоёр ургамал) ороно. Аргын зүб, найдбаритай, дахин дабтагдаха шадабариие хангахын тулада биологическа дабталга бүхэниие хоёр дахин (хоёр техническэ дабталга) шэнжэлһэн байна. Тобшохоноор хэлэбэл, 0.5 г газарай набшаһанай эдые 0.01% бутилированна гидрокситолуол (BHT; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) агуулһан 20% трихлоруксусай хүшэлтүрэгшэтэй (TCA; MilliporeSigma, Burlington, MA, USA) MDA экстракцида хэрэглэбэ. Удаань супернатант соохи MDA-гай хэмжээе UV-160A спектрофотометр (Shimadzu Corporation, Japan) хэрэглэн 532 ба 600 нм-эй шэнгээхэ шадабариие хэмжэжэ колориметрээр тодорхойлһон ба удаань nmol g−1 FW гэжэ тэмдэглэһэн байна.
Ферментгүй ба ферменттэй антиоксидантнуудые сэгнэхэдээ, эмшэлгын һүүлдэ 72 сагта (hpt) биологическа репликаци бүхэнһөө набшаһадые (дээдэ талаһаа хоёрдохи ба гурбадахи дүүрэн хүгжэһэн набшаһад) суглуулаа. Биологическа хубилалта бүхэн табан тогоонһоо бүридэнэ (нэгэ тогоондо хоёр ургамал). Биологиин дээжэ бүхэниие хоёр дахин (хоёр техническэ дээжэ) шэнжэлһэн байна. Хоёр набшаһа шэнгэн азотоор нунтаглаад, ферментнэ ба ферментнэ бэшэ антиоксидантнуудые, ниитэ аминохүшэлнүүдые, пролинай агууламжа, генэй илгарал, оксалат тодорхойлходо шууд хэрэглэбэ.
Ниитэ уһалдаг фенолнуудые Folin-Ciocalteu реагент (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) хэрэглэн, Kahkonen et al.-ай тодорхойлһон арга багахан хубилалтануудые оруулһанаар тодорхойлһон байна. (1999). Тобшохоноор хэлэбэл, ойролсоогоор 0.1 г гомогенизированна набшаһанай эдые 20 мл 80% метанолтой харанхыда 24 саг соо абажа, супернатантые центрифугировалһанай һүүлдэ суглуулаа. 0.1 мл дээжын экстрактые 0.5 мл Folin-Ciocalteu реагенттай (10%) холижо, 30 секундын туршада хүдэлгөөд, 5 мин харанхыда орхибо. Удаань 0.5 мл 20%-тай натрийн карбонадай урасхал (Na2CO3; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies Company, Cairo, Egypt) гуурһан бүхэндэ нэмэжэ, һайнаар холижо, 1 саг соо танхимай температурада харанхыда инкубаци хэбэ. Инкубациин һүүлдэ реакциин холисо шэнгээхэ шадабариие 765 нм-тэ UV-160A спектрофотометр (Shimadzu Corporation, Япон) хэрэглэн хэмжэбэ. Дээжын экстракт соохи ниитэ уһалдаг фенолой концентрациие галлиин хүшэлтүрэгшын калибровкын мурые (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) хэрэглэн тодорхойлһон ба шэнэ шэгнүүрэй нэгэ граммда галлиин хүшэлтүрэгшын эквивалент миллиграммаар (мг GAE g-1 шэнэ шэгнүүрэй) тэмдэглэбэ.
Ниитэ уһалдаг флавоноидуудай хэмжээе Djeridane et al.-ай аргаар тодорхойлһон байна. (2006) багахан хубилалтануудтай. Тобшохоноор хэлэбэл, дээрэхи метанолой экстрактын 0.3 мл-ые 0.3 мл 5%-тай алюминиин хлоридой урасхалтай (AlCl3; Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) холижо, шангаар хүдэлгэжэ, удаань 5 мин танхимай температурада инкубаци хэжэ, удаань 0.3 мл кислотно уксусай урасхал нэмэбэ. (Аль-Гомхориа эм зүйн ба эмнэлгын хэрэгсэлнүүд, Каир, Египет), һайнаар холижо, танхимай температурада 30 мин харанхыда инкубаци хэбэ. Инкубациин һүүлдэ реакциин холисо шэнгээхэ шадабариие 430 нм-тэ UV-160A спектрофотометр (Shimadzu Corporation, Japan) хэрэглэн хэмжэбэ. Дээжын экстракт соохи ниитэ уһалдаг флавоноидуудай концентраци рутинай калибровкын мурые (TCI America, Portland, OR, USA) хэрэглэн тодорхойлһон ба удаань шэнэ шэгнүүрэй граммда рутинай эквивалент миллиграммаар (мг RE g-1 шэнэ шэгнүүрэй) тодорхойлогдоһон байна.
Үбһэнэй набшаһанай ниитэ сүлөөтэ аминохүшэлэй хэмжээе Ёкояма ба Хирамацу (2003)-ай дурадхаһан арга дээрэ үндэһэлжэ, Sun et al. (2006). Тобшохоноор хэлэбэл, 0.1 г газарай эдые рН 5.4 буферээр абажа, 200 мкл супернатантые 200 мкл нингидрин (2%) ба 200 мкл пиридин (10%; Spectrum Chemical, New Brunswick, NJ, USA)-тай харилсан үйлэшэлжэ, бусалһан уһанда инкубаци хэжэ, удаань хүйтэн хэмжэжэ, хэмжэжэ 580 нм-тэ UV-160A спектрофотометр (Shimadzu Corporation, Japan) хэрэглэн. Нүгөө талаһаа, пролин Бэйтсын аргаар тодорхойлогдоһон байна (Bates et al., 1973). Пролин 3% сульфосалицилай хүшэлтүрэгшэтэй (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) абажа, центрифугировалһанай һүүлдэ 0.5 мл супернатантые 1 мл мүльһэн уксусай хүшэлтүрэгшэтэй (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) ба нингидринэй реагенттай холижо, 90°C-та инкубаци хэжэ, 455°C температурада инкубаци хэжэ, хүйтэн болгоо дээрэхитэй адли спектрофотометр хэрэглэн 520 нм-тэ хэмжэгдэһэн. Набшаһанай экстрактын ниитэ сүлөөтэ аминохүшэл ба пролин тус тусдаа глицин ба пролинай калибровкын мурые (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) хэрэглэн тодорхойлогдожо, мг/г шэнэ шэгнүүрээр тодорхойлогдоо.
Антиоксидант ферментүүдэй ферментнэ эдэбхитэй байдалые тодорхойлхын тулада ойролсоогоор 500 мг гомогенизированна эдые 3 мл 50 мМ Трис буферээр (рН 7.8) 1 мМ EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ба 7.5% полипирролидрон (PH; Сигма-Олдрич, Сент-Луис, МО, АНУ), 10,000 × g-ээр 20 мин хүйтэн газарта (4 °C) центрифугировалжа, супернатант (бүдүүн ферментэй экстракт) суглуулагдаһан (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023). Удаань каталаза (CAT) 2 мл 0.1 М натрийн фосфат буфертэй (рН 6.5; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ба 100 мкл 269 мМ H2O2 урасхалтай урбал хэжэ, Aebi (1984) slight-Nagar et al. 2023; Осман ба бусад, 2023). Гуайаколһоо дулдыдаха пероксидазын (POX) ферментын эдэбхитэй байдалые Harrach et al-ай аргаар тодорхойлһон байна. (2009). (2008) багахан хубилалтануудые оруулһан (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023) ба полифенол оксидазын (PPO) ферментнэ эдэбхитэй байдалые 2.2 мл 100 мМ натрийн фосфат буфертэй (pH 60), химиин бодосуудтай (100 μT, μT) харилсан үйлэшэлэлэй һүүлдэ тодорхойлһон байна. Портланд, Орегон, АНУ) ба 100 мкл 12 мМ H2O2. Энэ арга (Эль-Нагар ба бусад, 2023; Осман ба бусад, 2023)-һаа багахан хубилгагдаһан байна. Шэнжэлэлгэ 0.1 М фосфат буфертэ (рН 6.0) шэнэхэн бэлдэһэн 3 мл катехолой уһанда (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) (0.01 М) урбал хэһэнэй удаа хэгдэһэн байна. CAT-эй эдэбхитэй байдалые 240 нм-тэ H2O2-эй задаралые хинаха замаар хэмжэжэ үзэбэ (A240), POX-эй эдэбхитэй байдалые 436 нм-тэ (A436)-да шэнгээхэ шадабариин нэмэгдэлые хинаха замаар хэмжэжэ, PPO-эй эдэбхитэй байдалые 495 нм-тэ (A495) шэнгээхэ шадабариин хэлбэлзэлые 30 минута бүхэндэ UV-160A-спектрометр хэрэглэн бүридхэжэ хэмжэжэ үзэбэ (Симадзу, Япон).
Бодото сагта RT-PCR аргаар антиоксиданттай холбоотой гурбан генүүдэй транскриптын хэмжээе элирүүлһэн байна, энэ тоодо пероксисомальна каталаза (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), супероксиддисмутаза (PvSOD; GenBank Accession No. XM_0686395), ба глютитаза редуктаза (GenBank Accession No. Нэгэдэлэй дугаар KY195009.1), үрэһэтэй набшаһанда (дээдэ талаһаа хоёрдохи ба гурбадахи дүүрэн хүгжэһэн набшаһад) һүүлшын эмшэлгын һүүлдэ 72 саг. Тобшохоноор хэлэбэл, РНК-ые үйлэдбэрилэгшын протоколоор Simply P Total RNA Extraction Kit (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Biori Technology, China) хэрэглэн тусгаарлаһан байна. Удаань, кДНК-ые үйлэдбэрилэгшын заабариин ёһоор TOP scriptTM cDNA Synthesis Kit хэрэглэн синтезлэбэ. Дээрэхи гурбан генүүдэй праймерэй дараалалнууд нэмэлтэ таблица S3-да үгтэнэ. PvActin-3 (GenBank accession number: XM_068616709.1) гэрэй ген болгон хэрэглэгдэжэ, харисангы генэй илгарал 2-ΔΔCT аргаар тоосогдоо (Livak and Schmittgen, 2001). Биотическа стресс (ниитэ үрэһэтэй ургамалнууд ба антракноз мөөгөнцөр Colletotrichum lindemuthianum хоорондын таарамжагүй харилсан үйлэшэлэлгэ) ба абиотикын стресс (ган гасуур, дабһажалта, бага температура) доро актинай тогтвортой байдал харуулагдаа (Borges et al., 2012).
Бидэ анха S. sclerotiorum-да оксалоацетат ацетилгидролазын (OAH) уурагуудые уураг-уураг BLAST хэрэгсэл (BLASTp 2.15.0+) хэрэглэн геномой хэмжээнэй in silico шэнжэлэл хээбди (Altschul et al., 1997, 2005). Тобшохоноор хэлэбэл, бидэ Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; таксид: 1191702; GenBank нэбтэрэлгын дугаар XP_040799428.1; 342 аминохүшэл) ба Penicillium lagena (PlOAH; таксид: 94218; GenBank нэбтэрэлгын дугаар)-һаа OAH хэрэглээбди XP_056833920.1; 316 аминохүшэл) S. sclerotiorum (таксид: 5180) соохи гомолог уурагые карта дээрэ харуулха асуудалнуудай дараалалнууд болоно. BLASTp Үндэһэтэнэй Биотехнологиин Мэдээсэлэй Түбэй (NCBI) сайт дээрэ GenBank-да S. sclerotiorum геномой эгээл һаяын мэдээсэлтэй харисуулан хэгдэһэн байна, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/.
Нэмэжэ хэлэхэдэ, S. sclerotiorum (SsOAH)-һаа уридшалан мэдэгдэһэн OAH ген болон A. fijiensis CBS 313.89-һаа AfOAH-һаа хубисхалай шэнжэлэл ба филогенетическэ модон болон P. lagena-һаа PlOAH-һаа MEGA11 (Tamura et al., 2021) болон JTT-based загбарта (JTT et al. бусад, 1992). Филогенетическэ модые S. sclerotiorum-һаа бүхы уридшалан мэдэгдэһэн OAH генүүдэй (SsOAH) уурагуудай дараалалнуудай олон тэгшэлгын шэнжэлэлтэй болон асуудалнуудай дараалалые Constraint-Based Alignment Tool (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/cobalt) болон (Pagialt. Агарвала, 2007 он). Нэмэжэ хэлэхэдэ, S. sclerotiorum-һаа SsOAH-ай эгээл һайн таараһан аминохүшэлэй дараалалнуудые ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) хэрэглэн асуудалнуудай дараалалнуудтай (AfOAH ба PlOAH) (Larkin et al., 2007) тааруулжа, ESP хэрэгсэл (3.0 хубилалта; https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php).
Үшөө тиихэдэ, S. sclerotiorum SsOAH-ай уридшалан хэлэгдэһэн функциональна түлөөлхэ доменүүд болон хадгалагдаһан газарнуудые InterPro хэрэгсэл (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) хэрэглэн ондо ондоо бүлэгүүдтэ интерактивна аргаар ангилһан байна (Blum et al., 2021). Һүүлдэнь, уридшалан хэлэгдэһэн S. sclerotiorum SsOAH-ай гурбан хэмжээнэй (3D) бүтэсэ загбарлалые Protein Homology/Analogy Recognition Engine (Phyre2 серверэй 2.0 хубилалта; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cid=index) (Kelley et al.) хэрэглэн хэгдэһэн байна. 2015) ба SWISS-MODEL сервер (https://swissmodel.expasy.org/) хэрэглэн баталагдаа (Biasini et al., 2014). Уридшалан хэлэгдэһэн гурбан хэмжээнэй бүтэсэ (PDB формат) UCSF-Chimera багтаамжа (1.15-дахи хубилалта; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) (Pettersen et al., 2004) хэрэглэн интерактивна аргаар харуулагдаһан байна.
Тоогой бодото сагта флуоресценциин ПЦР-ые Sclerotinia sclerotiorum-ай мицелидэ оксалоацетат ацетилгидролазын (SsOAH; GenBank accession number: XM_001590428.1) транскрипционно хэмжээе тодорхойлходо хэрэглэбэ. Тобшохоноор хэлэбэл, S. sclerotiorum PDB агуулһан колбодо таряалан, мицелиин ургалтые эдэбхижүүлхын тулада 25 ± 2 °C температурада 24 саг соо 150 эргэлтээр ба байнгын харанхыда (24 саг) һэжэрһэн инкубаторта (модель: I2400, New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, USA) табиһан байна. Удаань эсүүдые L-орнитин ба фунгицид Rizolex-T-ээр һүүлшын IC50 концентрацида (ойролсоогоор 40 ба 3.2 мг/л, тус тус) эмшэлжэ, удаань үшөө 24 саг соо адли нөхцөлд үрэжүүлһэн байна. Инкубациин һүүлдэ культурнуудые 2500 эргэлтэ/мин-ээр 5 мин центрифугировалжа, генэй илгарал шэнжэлэлгын тулада супернатант (мөөгөнцөрөй мицелий) суглуулаа. Үшөө тиихэдэ, халдабарита эдэй гадаргуу дээрэ сагаан хөгц ба хүлһэн мицелий бии болоһон халдабарита ургамалнуудһаа халдабариин һүүлдэ 0, 24, 48, 72, 96, 120 сагта мөөгөнцөрөй мицели суглуулагдаһан байна. РНК-ые мөөгөнцөрөй мицелиһээ гаргажа абаад, удаань дээрэ тодорхойлһон ёһоор кДНК-ые синтезлэбэ. SsOAH-ай праймерэй дараалалнууд нэмэлтэ таблица S3-да үгтэнэ. SsActin (GenBank accession number: XM_001589919.1) гэрэй ажахын ген болгон хэрэглэгдэжэ, харисангы генэй илгарал 2-ΔΔCT аргаар тоосогдоо (Livak and Schmittgen, 2001).
Щавельнэ хүшэлые Xu and Zhang (2000)-ай аргаар багахан хубилалтануудые оруулһан Sclerotinia sclerotiorum гэһэн мөөгөнцөрөй эмгэг үүсхэгшэ таряанай декстрозын шүлэндэ (PDB) болон ургамалай дээжэдэ тодорхойлһон байна. Тобшохоноор хэлэбэл, S. sclerotiorum изоляцинуудые PDB агуулһан колбонуудта таряалан, удаань мицелиин ургалтые эдэбхижүүлхын тулада 25 ± 2 °C-та 3–5 хоногой туршада тогтомол харанхыда (24 саг) хүдэлгэхэ инкубаторта (I2400 загбар, New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, USA) үрэжүүлһэн байна. Инкубациин һүүлдэ мөөгөнцөрөй соёлые түрүүн Whatman #1 шүүгшын саарһаар шүүжэ, удаань 2500 эргэлтэ/мин-ээр 5 мин центрифугировалжа, үлэгдэл мицелиие зайлуулһан байна. Супернатантые суглуулжа, 4°C-та хадагалжа, оксаладые саашадаа тоосоогоор тодорхойлбо. Ургамалай дээжые бэлдэхэдээ, ойролсоогоор 0,1 г ургамалай эдэй хэһэгүүдые нэрэмэл уһаар гурба дахин (2 мл) гаргажа абаһан байна. Удаань дээжые 2500 эргэлтэ/мин-ээр 5 мин центрифугировалжа, дээдын шүүһэниинь Whatman No. 1 шүүгшын саарһаар хуурайгаар шүүгдэжэ, саашадаа шэнжэлэл хэхэеэ суглуулаа.
Щавельнэ хүшэлые тоогой шэнжэлэл хэхэдээ, реакциин холисо иимэ дараалалаар шэлтэй гуурһан соо бэлдэһэн байна: 0.2 мл дээжэ (гү, али PDB культурын шүүһэн гү, али щавелэй хүшэлтүрэгшын стандарт урасхал), 0.11 мл бромфенол хүхэ (BPB, 1 мМ; Fisher Chemical, Pittsburgh, USA, 1918 мл Ml. хүхэрэй хүшэлтүрэгшэ (H2SO4; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Egypt) ба 0.176 мл 100 мМ калиин дихромат (K2Cr2O7; TCI chemicals, Portland, OR, USA), удаань урасхалые 48 мМ шэнгэн уһанда шэнгээжэ, шангаар холиһон байна. тэрэл дороо 60 °C уһанай ваннада оруулна. мин болоод, 0.5 мл натрийн гидроксидэй урасхал (NaOH; 0.75 М) нэмэжэ урбалые зогсооһон байна. Харилсаанай холисо шэнгээхэ шадабариие (A600) 600 нм-тэ UV-160 спектрофотометр (Shimadzu Corporation, Япон) хэрэглэн хэмжэжэ үзэбэ. PDB ба нэрмэгдэһэн уһа тус тусдаа соёлой шүүһэн ба ургамалай дээжые тодорхойлходо хяналтын хэрэгсэл болгон хэрэглэгдээ. Соёлой шүүһэн соохи шүлтэнэй хүшэлтүрэгшын концентраци, PDB оршоной миллилитртэ шүлтэнэй хүшэлтүрэгшын микрограммаар (μg.mL−1), набшаһанай экстрактнуудта, шүлтэнэй хүшэлые нэгэ грамм шэнэхэн шэгнүүрэй микрограммаар (μg.g−1 FW) тодорхойлһон, шүлтэнэй хүшэлтүрэгшын концентраци (The Firmors) хэрэглэн тодорхойлогдоһон байна. Эрдэмэй химиин бодосууд, Уолтем, Массачусетс, АНУ).
Шэнжэлэлгын туршада бүхы туршалгануудые бүрин рандомизированна дизайнаар (CRD) зохёон бүтээһэн байна, энэнь нэгэ эмшэлгэ бүхэндэ зургаан биологическа дабталга, нэгэ биологическа дабталгада табан тогоон (нэгэ тогоон соо хоёр ургамал) байгаа. Биологиин дабталгануудые хоёр дахин шэнжэлһэн байна (хоёр техническэ дабталга). Техническэ дабталгануудые нэгэ туршалгын дабтагдаха шадабариие шалгахын тулада хэрэглэбэшье, худал дабталгануудһаа зайлахын тулада статистикын шэнжэлэл хэхэдээ хэрэглээгүй. Мэдээллые дисперсиин шэнжэлэл (ANOVA) хэрэглэн, удаань Tukey-Kramer-эй үнэн сэхэ удха шанартай илгаа (HSD) тест (p ≤ 0.05) хэрэглэн статистикээр шэнжэлһэн байна. In vitro туршалгануудта IC50 ба IC99 сэнгүүдые пробит загбарые хэрэглэн тооложо, 95% найдабариин забһарнуудые тоолоһон байна.
Египедэй Эль-Габия можын элдэб соргоной таряаланһаа дүрбэн изоляци суглуулагдаһан байна. PDA оршон дээрэ бүхы изоляцинууд сагаан үнгэтэй мицелий гаргажа, түргэн сагаан үнгэтэй болоһон (Зураг 1А), удаань склеротиин шатада шаргал гү, али хүрин үнгэтэй болоһон. Склеротинууд ехэнхидээ нягта, хара, бүмбэрсэг гү, али тогтомол бэшэ хэлбэритэй, 5.2-7.7 мм ута, 3.4-5.3 мм диаметртэй байдаг (Зураг 1В). Хэдыгээр дүрбэн тусгаарлалта 25 ± 2 °C-та 10–12 хоногой туршада инкубаци хэһэнэй удаа үрэжүүлгын оршоной захада склеротиин захын хэб маягые бии болгоһоншье һаа (Зураг 1А), нэгэ табагта склеротиин тоо тэдэнэй хоорондо мэдэгдэхүйсэ илгаатай байгаа (P < 0.001), 3-дахи тусгаарлалта эгээн ехэ склеротиин тоотой байгаа (33 ± 33.001). нэгэ табагта склероти; Зур. 1С). Үшөө тиихэдэ, 3-дахи тусгаарлалта бусад тусгаарлалтануудһаа (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; Зур. 1D) PDB-дэ үлүү шүлтэнэй хүшэлтүрэгшэ гаргадаг. 3-дахи тусгаарлалта фитопатоген Sclerotinia sclerotiorum мөөгөнцөрөй морфологическа ба микроскопическа шэнжэ шанарнуудые харуулһан байна. Жэшээнь, PDA дээрэ 3-дахи изоляциин колонинууд түргэн ургадаг, шэхэрлиг сагаан (Зураг 1А), урбуу шаргал гү, али лосось шара-хүрин үнгэтэй, 9 см диаметртэй хабтаһанай гадаргууе бүрин хушахын тулада 25 ± 2°C-та 6-7 хоног хэрэгтэй болодог. Дээрэхи морфологическа ба микроскопическа шэнжэнүүд дээрэ үндэһэлэн, 3-дахи изолят Sclerotinia sclerotiorum гэжэ тодорхойлогдоо.
Зураг 1. Ниитэ үрэһэтэй ургамалнуудһаа S. sclerotiorum изоляциин шэнжэ шанар ба эмгэг үүсхэгшэ. (A) PDA оршон дээрэ дүрбэн S. sclerotiorum изоляциин мицелиин ургалтань, (B) дүрбэн S. sclerotiorum изоляциин склероти, (C) склеротинуудай тоо (нэгэ табагта), (D) PDB оршон дээрэ шүлтэнэй хүшэлтүрэгшын шүүрэл (μg.mL−1), ба (E) дүрбэн S. sclerotiorum тусгаарлалтануудай үбшэнэй хүндэ байдал (%). сортын Гиза 3 теплицын байдалда. Утаһаниинь табан биологическа дабталгын (n = 5) дунда зэргые ± SD харуулна. Ондоо үзэгүүд эмшэлгын хоорондохи статистикын удха шанартай илгаануудые харуулна (p < 0.05). (F–H) Газар дээрэхи һэеы болон кремнезем дээрэ сагаан хүгшэн шэнжэ тэмдэгүүд тус тусдаа 3-дахи тусгаарлалтатай (dpi) тарилга хэһэнэй һүүлдэ 10 хоногой дараа бии болоо. (I) S. sclerotiorum изолят #3-ай дотоодо транскрипциин зайлагша (ITS) бүһын хубисхалай шэнжэлэлые эгээн ехэ магадлалтай аргаар хэжэ, Үндэһэтэнэй биотехнологиин мэдээсэлэй түбэй (NCBI) мэдээсэлэй санһаа (https://www.ncbi.nlm.go.v./) абтаһан 20 һургаалта изолят/штаммтай зэргэсүүлһэн байна. Кластеризациин шугамууд дээрэхи тоонууд нютаг дэбисхэрэй хамаралтые (%) харуулна, харин кластеризациин шугамуудһаа доорохи тоонууд һалбариин ута харуулна.
Үшөө тиихэдэ, эмгэг үүсхэгшэ байдалые баталхын тулада, абтаһан дүрбэн S. sclerotiorum изоляцинуудые хүйтэн байшангай байдалда мэдрэмтгий олзын хэрэг эрхилэлгын үрмэ сортын Giza 3 тарилгада хэрэглэбэ, энэнь Кохын постулатуудтай тааруу (Зураг 1Е). Хэдыгээр бүхы абтаһан мөөгөнцөрөй тусгаарлалтанууд эмгэг үүсхэгшэ, ногоон үрэһэ халдабарилха аргатай (cv. Giza 3), газар дээрэхи бүхы хэһэгүүдтэ (Зураг 1F), илангаяа тарилгын һүүлдэ 10 хоногой дараа үрэһэ (Зураг 1G) ба үрэһэ (Зураг 1H) дээрэ сагаан хүгшэн шэнжэтэй шэнжэ тэмдэгүүдые үүсхэжэ байгаашье һаа, тусгаарлалта эгээл агрессивна байгаа (33). хоёр бэеэ дааһан туршалганууд. 3-дахи тусгаарлалта үрэһэтэй ургамалнуудта эгээл ехэ үбшэнэй хүндэтэй (%) байгаа (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, ба 76.7 ± 3.1 халдабариин һүүлдэ 7, 14, ба 21 хоногто тус тусдаа; Зураг 1F).
Эгээл нэбтэрһэн S. sclerotiorum изолят #3-ые элирүүлгэ дотоодо транскрипциин зайлагша (ITS) дараалал дээрэ үндэһэлжэ баталагдаа (Зураг 1I). Изолят #3 ба 20 стандарт изолят/штаммуудай хоорондохи филогенетическэ шэнжэлэл тэдэнэй хоорондо үндэр адлирхуу байдал (>99%) харуулһан байна. S. sclerotiorum изолят #3 (533 н.б.) хуурай вандуй үрэһөө тусгаарлагдаһан Америкын S. sclerotiorum изолят LPM36-тай (GenBank нэбтэрэлгын дугаар MK896659.1; 540 нб) ба Хитадай S. sclerotiorum тусгаарлалтатай YK896659.1 (GenBank нэбтэрэлгын дугаартай) үндэр адлирхуу гэжэ тэмдэглэхэ шухала. OR206374.1; 548 bp), энэнь нил үнгэтэй (Matthiola incana) үндэһэнэй ялзарал үүсхэнэ, эдэ бүгэдэ дендрограммын оройдо тус тус бүлэглэгдэнэ (Зураг 1I). Шэнэ дараалал NCBI мэдээсэлэй сан соо оруулагдажа, “Sclerotinia sclerotiorum – YN-25 тусгаарлалта” (GenBank нэбтэрэлгын дугаар PV202792) гэжэ нэрлэгдэһэн байна. 3-дахи тусгаарлалта эгээл нэбтэрһэн тусгаарлалта гэжэ харагдана; тиимэһээ энэ тусгаарлалта бүхы удаадахи туршалгануудта шэнжэлхэ зорилгоор шэлэгдэбэ.
Диамин L-орнитинай (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) элдэб концентрацида (12.5, 25, 50, 75, 100 ба 125 мг/л) S. sclerotiorum изолят 3-да эсэргүү бактериин эсрэг эдэбхитэй байдалые in vitro шэнжэлһэн байна. L-орнитин антибактериальна нүлөө үзүүлжэ, тунһаа дулдыдаха аргаар S. sclerotiorum гифануудай радиальна ургалтые аажамаар даража байһаниинь тэмдэглэлтэй (Зураг 2А, В). Туршаһан эгээн ехэ концентрацида (125 мг/л) L-орнитин эгээл ехэ мицелиин ургалтын даралгын хэмжээе (99.62 ± 0.27%; Зураг 2В) харуулһан, энэнь худалдаанай фунгицид Rizolex-T (даралга 99.45 ± 0.39%; Зураг 2C)-тай адли байгаа, туршалгын үндэр концентрацида (10 мг/л). адлирхуу үрэ дүнтэй байһые харуулна.
Зураг 2. L-орнитинай Sclerotinia sclerotiorum-да эсэргүү in vitro бактериин эсрэг үйлэшэлгэ. (A) S. sclerotiorum-да эсэргүү L-орнитинай элдэб концентрациин антибактериальна эдэбхитэй байдалые худалдаанай фунгицид Rizolex-T (10 мг/л)-тай зэргэсүүлгэ. (B, C) L-орнитинай (12.5, 25, 50, 75, 100 ба 125 мг/л) гү, али Rizolex-T (2, 4, 6, 8 ба 10 мг/л) ондо ондоо концентрацитай эмшэлһэн хойно S. sclerotiorum мицелиин ургалтын даралгын хэмжээ (%). Утаһаниинь табан биологическа дабталгын (n = 5) дунда зэргые ± SD харуулна. Ондоо үзэгүүд эмшэлгын хоорондохи статистикын илгаае тэмдэглэнэ (p < 0.05). (D, E) L-орнитин ба худалдаанай фунгицид Rizolex-T-эй пробит загбарай регрессиин шэнжэлэл. Пробит загбарай регрессиин шугам хатуу хүхэ шугамаар харуулагдана, харин найдабариин забһар (95%) зурлаатай улаан шугамаар харуулагдана.
Нэмэжэ хэлэхэдэ, пробит регрессиин шэнжэлэл хэгдэһэн ба таараһан графигуудые 1-дэхи таблицада ба 2D,E зурагуудта харуулаа. Тобшохоноор хэлэбэл, L-орнитинай хүлеэн зүбшөөрэгдэхэ налуугай сэн (y = 2.92x − 4.67) ба холбоотой удха шанартай статистика (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ба p < 0.0001; Зураг 2D) S-орнитинэй эсрэг мөөгөнцөрөй эсрэг эдэбхитэй байдалые S-орнитинтэй харисуулхада дээшэлүүлһэн байна. фунгицид Ризолекс-Т (y = 1.96x − 0.99, Cox & Snell R2 = 0.1242, Nagelkerke R2 = 0.1708 ба p < 0.0001) (Хүснэгтэ 1).
Таблица 1. S. sclerotiorum-да эсэргүү L-орнитин ба худалдаанай фунгицид “Rizolex-T”-эй хахад дээдын дарангы концентрациин (IC50) ба IC99 (мг/л) сэн.
Юрэнхыдөө, L-орнитин (250 мг/л) эмшэлэгдэһэн юрын үрэһэтэй ургамалнууд дээрэ сагаан хөгцөөнэй хүгжэлые ба хүндэ байдалые эмшэлэгдэдэггүй S. sclerotiorum-ээр халдабарилагдаһан ургамалнуудтай харисуулхада мэдэгдэхүйсэ багадхаһан байна (хяналтын; Зураг 3А). Тобшохоноор хэлэбэл, эмшэлэгдэдэггүй халдабарита хяналтын ургамалай үбшэнэй хүндэ байдал аажамаар нэмэгдэһэншье һаа (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, ба 92.33 ± 3.06%), L-орнитин туршалгын туршада үбшэнэй хүндэ байдалые (%) мэдэгдэхүйсэ багадхаһан (8.97 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, ба 92.33 ± 3.06%) (8.97 ± 0.15, ба 1.00 ± .000, ба 1.00, 100 ± .000). 26.36 ± 3.07) эмшэлгын һүүлдэ 7, 14, 21 хоногто (dpt), тус тусдаа (Зураг 3А). Үшөө тиихэдэ, S. sclerotiorum-ээр халдабарилагдаһан үрэһэтэй ургамалнуудые 250 мг/л L-орнитинээр эмшэлхэдэ, үбшэнэй үргэлжэлэлэй муруй (AUDPC) дорохи талмай эмшэлэгдэдэггүй хяналтын бүлэгтэ 1274.33 ± 33.13-һаа 281.03 ± 7.95 болотор буурһан, энэнь эерэг хяналтын бүлэгһөө бага байгаа. мг/л Ризолекс-Т фунгицид (183.61 ± 7.71; Зур. 3В). Хоёрдохи туршалгада баһал иимэ шэнжэ тэмдэглэгдээ.
Зур. 3. Хүлэмжын оршон байдалда Sclerotinia sclerotiorum-һаа үүдэһэн юрын үрэһэнэй сагаан ялзарал хүгжэлтэдэ L-орнитинай экзогеннэ хэрэглэлгын нүлөө. (A) 250 мг/л L-орнитинээр эмшэлһэн хойно юрын үрэһэтэй сагаан хэбтэшэ үбшэнэй үргэлжэлэлэй муруй. (B) L-орнитинээр эмшэлһэн хойно юрын үрэһэтэй сагаан хэбтэшэ үбшэнэй үргэлжэлэлэй мурые (AUDPC) доорохи талмай. Утаһаниинь табан биологическа дабталгын (n = 5) дунда зэргые ± SD харуулна. Ондоо үзэгүүд эмшэлгын хоорондохи статистикын удха шанартай илгаануудые тэмдэглэнэ (p < 0.05).
250 мг/л L-орнитинай экзогеннэ хэрэглэлгэ 42 хоногой һүүлдэ ургамалай үндэрые (Зураг 4А), нэгэ ургамалай һалаануудай тоо (Зураг 4В), нэгэ ургамалай набшаһанай тоо (Зураг 4С) аажамаар нэмэгдүүлһэн байна. Худалдаанай фунгицид Rizolex-T (50 мг/л) шэнжэлэгдэһэн бүхы эдеэ хоолой үзүүлэлтэдэ эгээл ехэ нүлөө үзүүлһэн болобошье, 250 мг/л L-орнитинэй экзогеннэ хэрэглэлгэ эмшэлэгдэдэггүй хяналтын бүлэгтэй харисуулхада хоёрдохи ехэ нүлөө үзүүлһэн байна (Зураг 4А–С). Нүгөө талаһаа, L-орнитин эмшэлгэ фотосинтезэй пигментнүүдэй хлорофилл а (Зураг 4D) ба хлорофилл b (Зураг 4Е)-эй агууламжада үндэр нүлөө үзүүлээгүй, харин каротиноидай ниитэ агууламжа (0.56 ± 0.03 мг/г шэгнүүр) бага зэргэ нэмэгдүүлһэн (0.56 ± 0.03 мг/г шэгнүүр) сүлөөтэ хяналтатай (0.440 ± ш хяналтын (0.46 ± 0.02 мг/г шэгнүүр; 4F зураг). Юрэнхыдөө, эдэ дүнгүүд L-орнитин эмшэлһэн буурцагуудта фитотоксик бэшэ, бүри тэдэнэй ургалтые эдэбхижүүлжэ магадгүй гэжэ харуулна.
Зур. 4. Хүлэмжын оршон байдалда Sclerotinia sclerotiorum халдабаритай үрэһэтэй набшаһанай ургалтын шэнжэ шанар болон фотосинтезэй пигментнүүдтэ экзогеннэ L-орнитин хэрэглэлгын нүлөө. (A) Ургамалай үндэр (см), (B) Нэгэ ургамалай һалаануудай тоо, (C) Нэгэ ургамалай набшаһанай тоо, (D) Хлорофилл a агууламжа (мг г-1 фр шэгнүүр), (Е) Хлорофилл b агууламжа (мг г-1 фр шэгнүүр), (Е) Ниитэ каротиноид агууламжа (мг г-1 фр шэгнүүр). Утаһаниинь табан биологическа дабталгын (n = 5) дунда зэргынь ± SD болоно. Ондоо үзэгүүд эмшэлгын хоорондохи статистикын удха шанартай илгаануудые харуулна (p < 0.05).
Реактивна хүшэлтүрэгшын зүйлнүүдэй (ROS; уһантүрэгшын пероксид [H2O2]) ба сүлөөтэ радикалнуудай (супероксид анионууд [O2•−] гэжэ илгаруулагдаһан) in situ гистохимиин локализаци L-орнитин (250 мг/л)-ые экзогеннэ хэрэглэлгэ HO2-ой хуримталалые мэдэгдэхүйсэ багадхаһан гэжэ элирүүлһэн байна (250 ± 355 . nmol.g−1 FW; Зур. 5А) ба O2•− (32.69 ± 8.56 нмоль.g−1 FW; Зур. 5B) эмшэлүүлээгүй халдабарита ургамалнуудай (173.31 ± 12.06 ба 149.35 ± 7.94 нмол FW, тус тусдаа эмшэлһэн ургамал) сугларһантай харисуулхада мг/л худалдаанай фунгицид Rizolex-T (170.12 ± 9.50 ба 157.00 ± 7.81 нмоль.g−1 fr wt, тус тусдаа) 72 сагта. hpt доро үндэр хэмжээнэй H2O2 ба O2•− суглардаг (Зур. 5А, В). Үшөө тиихэдэ, TCA-дэ үндэһэлһэн малондиальдегид (MDA) шэнжэлэлгын дүнгөөр ​​S. sclerotiorum-ээр халдабарилагдаһан үрэһэтэй ургамалнууд набшаһандаа MDA-гай үндэр хэмжээ (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) суглуулһан байна (Зураг 5С). Гэбэшье, L-орнитинай экзогеннэ хэрэглэлгэ липидэй пероксидациие ехээр багадхаһаниинь эмшэлһэн ургамалнуудта MDA-гай агууламжа буурһанаар гэршэлэгдэнэ (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt).
Зур. 5. Хүлэмжын нөхцөлд халдабариин һүүлдэ 72 сагта S. sclerotiorum-ээр халдабарилагдаһан үрэһэтэй набшаһанай исэлдэлтын стрессэй гол тэмдэглэгшэд болон ферментгүй антиоксидант хамгаалха механизмуудта экзогеннэ L-орнитин хэрэглэлгын нүлөө. (A) Уһантүрэгшын пероксид (H2O2; nmol g−1 FW) 72 hpt-да, (B) супероксид анион (O2•−; nmol g−1 FW) 72 hpt-да, (C) малондиальдегид (MDA; nmol g−1 FW) 72 hpt-да, (D) ниитэ уһанда шэнгэдэг фенол (Nmol g−1 FW) 72 hpt-да hpt, (E) ниитэ уһалдаг флавоноидууд (мг RE g−1 FW) 72 hpt-дэ, (F) ниитэ сүлөөтэ аминохүшэлнүүд (мг g−1 FW) 72 hpt-дэ, ба (G) пролинай агууламжа (мг g−1 FW) 72 hpt-дэ. Утаһаниинь 5 биологическа дабталгын (n = 5) дунда зэргые ± стандарт хазагайралта (дунда зэргые ± SD) харуулна. Ондоо үзэгүүд эмшэлгын хоорондохи статистикын удха шанартай илгаануудые харуулна (p < 0.05).